李守信 1, 2，張則平 1, 2，邱新建 1, 2，賀鳳成 1, 2，蘇瑞強(qiáng) 1, 2，趙志全 1, 2

1.       魯南制藥集團(tuán)股份有限公司，山東 臨沂 276006

2.       中藥制藥共性技術(shù)國家重點(diǎn)實驗室，山東 臨沂 276006

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摘 要：目的 研究生脈散超微粉的顯微特征和溶出度差異，為生脈超微粉應(yīng)用提供實驗依據(jù)。方法 采用光學(xué)顯微鏡觀察顆粒顯微結(jié)構(gòu)；電鏡掃描觀察微觀形貌；以五味子甲素和五味子乙素為指標(biāo)，采用 HPLC 法測定生脈散細(xì)粉和超微粉在不同時間溶出的量，計算累積溶出度。結(jié)果 生脈散經(jīng)超微粉碎后，基本無完整細(xì)胞存在，粒度均勻；生脈散超微粉中五味子甲素和五味子乙素溶出速率高于細(xì)粉，但是 180 min 后累積溶出量沒有明顯差異。結(jié)論 超微粉碎可使生脈散顯微特征變化明顯，化學(xué)成分五味子甲素和五味子乙素溶出速率加快。

關(guān)鍵詞：生脈散；超微粉；顯微特征；五味子甲素；五味子乙素；溶出度

中圖分類號：R286.02        文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A        文章編號：1674 - 5515(2013)02 - 0175 - 04

DOI:10.7501/j.issn.1674-5515.2013.02.017

Micro-characteristic and dissolution of ultra-micro Shengmai Powder

LI Shou-xin1, 2, ZHANG Ze-ping1, 2, QIU Xin-jian1, 2, HE Feng-cheng1, 2, SU Rui-qiang1, 2, ZHAO Zhi-quan1, 2

1.       Lunan Pharmaceutical Group Co., Ltd. Linyi 276006, China

2.       State Key Laboratory of Generic Manufacture Technology of Chinese Traditional Medicine, Linyi 276006, China

Abstract: Objective To study the micro-characteristic and dissolution of ultra-micro powder in Shengmai Powder, and to provide experimental foundation for the application of ultra-micro powder in Shengmai Powder. Methods The microstructure was observed by light microscope and the micro shape was observed by .electron microscope scanning. The dissolutions of Shengmai Powder and ultra-micro powder in Shengmai Powder at different time were determined by HPLC using schizandrins A ａnd B as indexes. Results Compared with the common powder, the cellules of ultra-micro powder were pulverized, and the particles were tiny without intact cells and uniform. The cumulative dissolution rates of schizandrins A and B in ultra-micro powder were higher than those in the traditional common powder, but there was no significant difference after 180 min. Conclusion The micro-characteristic of ultra-micro powder in Shengmai Powder is obviously changed after ultrafine grinding, and the dissolution velocity of schizandrins A and B increases.

Key words: Shengmai Powder; ultra-micro powder; micro-characteristics; schizandrin A; schizandrin B; dissolution

生脈散為中醫(yī)經(jīng)典名方，由人參、麥冬、五味子組成，具有益氣生津、養(yǎng)心補(bǔ)肺、大補(bǔ)元?dú)?、固脫?fù)脈的功效，臨床上常用于治療氣陰兩虛患者。生脈散含有木質(zhì)素、人參皂苷、麥冬皂苷、多糖等多種成分，具有改善心肌代謝、保護(hù)心肌、調(diào)節(jié)血壓、抗休克作用，臨床廣泛應(yīng)用于治療多種疾病，特別在治療心血管疾病方面取得顯著療效[1-2]。中藥材多來源于天然的動植物組織，有效成分存在于細(xì)胞內(nèi)，只有釋放出來才能被機(jī)體吸收利用，細(xì)胞膜（壁）是限制成分?jǐn)U散溶出的最主要障礙[3]。中藥超微粉碎是以中藥材細(xì)胞破壁為目的的粉碎作業(yè)，能將中藥材從傳統(tǒng)粉碎工藝得到粒徑為 150 μm（100目）的粉末提高到中心粒徑為 5～47 μm 的超微粉，粒徑分布在 1 ～ 75 μm， 藥材細(xì)胞壁破壁率≥ 90%[4-5]，細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)可充分暴露出來，消除了細(xì)胞壁和細(xì)胞膜對物質(zhì)交換的障礙，從而提高有效成分的釋放速度和量，提高生物利用度和藥效作用，并可減輕制劑服用時的砂粒感，該技術(shù)在中藥生產(chǎn)已顯露出的優(yōu)勢[6-8]。本實驗通過比較生脈散超微粉和細(xì)粉的顯微特征以及活性成分五味子甲素、五味子乙素的溶出情況，為生脈散超微粉應(yīng)用提供實驗數(shù)據(jù)。

LRVM—MHS—BE 型高頻震動研磨機(jī)；Winner 3003 全自動干法激光粒度儀、Winner 90D 顆粒圖像分析儀（濟(jì)南微納顆粒儀器股份有限公司）； SUPRA55 熱場發(fā)射掃描電子顯微鏡（德國 Zeiss 公司）；ZRS—8G 智能溶出試驗儀（天津大學(xué)無線電廠）；Agilent 1100 高效液相色譜儀（美國 Agilent公司）；Mettler Toledo AG285 電子分析天平（d=0.01 mg，梅特勒托利多儀器有限公司）；KQ 5200DB 型超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）。

紅參、麥冬、五味子經(jīng)我公司分析室檢驗，均符合《中國藥典》2010 年版一部要求；生脈散細(xì)粉（100 目，紅參、麥冬、五味子比例為 1∶2∶1）由魯南厚普制藥有限公司提供，批號  、  、  ； 五味子甲 素（批號 110764-201010）、五味子乙素（批號 110765-200407）由中國藥品生物制品檢定所提供，乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1超微粉的制備

取生脈散細(xì)粉，置高頻震動研磨機(jī)中，裝料系數(shù) 55%，0 ℃研磨 15 min，過 300 目篩，即得。

2.2粒徑分布的測定

分別取生脈散細(xì)粉和超微粉適量，置激光粒度分布儀中干法測定粒徑分布，見圖 1。生脈散細(xì)粉的 D50、D90 分別為 103.6、191.6 μm；生脈散超微粉的 D50、D90 分別為 33.6、66.7 μm，粒徑顯著的減小。

 

2.3顯微結(jié)構(gòu)觀察

分別取生脈散細(xì)粉和超微粉適量，用透化，置顯微鏡下觀察粉末顯微結(jié)構(gòu)。生脈散細(xì)粉來源于紅參的主要是簇晶和導(dǎo)管：可見草酸鈣簇晶，直徑 20～68 μm，棱角尖銳；可見網(wǎng)紋導(dǎo)管或梯紋導(dǎo)管，直徑 10～56 μm；來源于五味子的主要是石細(xì)胞：可見多角形石細(xì)胞，直徑 18～50 μm，壁厚，孔溝細(xì)密。可見不規(guī)則形石細(xì)胞，直徑約 83 μm，壁稍厚，紋孔較大。來源于麥冬的主要是針晶束和木纖維：可見草酸鈣針晶散在或成束；可見木纖維的纖維束。生脈散超微粉多見黃綠色或黃棕色小顆粒狀物，可見石細(xì)胞碎片，壁厚或稍厚；可見導(dǎo)管碎片；未見完整細(xì)胞。

2.4微觀形貌觀察

取樣品適量，噴金鍍膜后，置于電鏡下進(jìn)行微觀形貌觀察。生脈散細(xì)粉顆粒大，組織結(jié)構(gòu)特征明顯，可見導(dǎo)管紋理和球形石細(xì)胞，見圖 2。生脈散超微粉顆粒細(xì)小均勻，團(tuán)聚明顯，組織結(jié)構(gòu)特征不明顯，見圖 3。

 

2.5 五味子甲素和五味子乙素的 HPLC 法測定

2.5.1 色譜條件 色譜柱為 Kromasil C18 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈–水（69∶

31）；檢測波長為 254 nm；柱溫為 40 ℃；體積流量為 1.0 mL/min；進(jìn)樣量為 10 μL。按上述條件，五味子甲素、五味子乙素與其他成分的峰分離較好，樣品色譜峰保留時間與相應(yīng)的對照品保持一致，見圖 4。

2.5.2 對照品溶液的制備 分別精密稱取五味子甲素、五味子乙素對照品適量，用甲醇配制成質(zhì)量濃度分別為 18.1、46.1 μg/mL 的混合對照品溶液，備用。

2.5.3 供試品溶液的制備 分別生脈散細(xì)粉和超微粉約 2 g，精密稱定，置 100 mL 錐形瓶中，精密加入甲醇 50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率 160 W，頻率 40 kHz）60 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，0.45 μm 濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.5.4 線性關(guān)系考察 精密吸取混合對照品溶液 1、2、4、8、10 μL，進(jìn)樣分析，各進(jìn)樣 3 次，取平均值。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，計算得回歸方程。五味子甲素：Y=18 015 X＋1.024 1

（r=0.999 9），五味子乙素：Y=16 213 X＋0.125 3（r=0.999 9），結(jié)果表明五味子甲素、五味子乙素分別在 0.018 1～0.181 μg、0.046 1～0.461 μg 線性關(guān)系良好。

2.5.5 精密度試驗 精密吸取混合對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣 6 次，每次 10 μL，計算得五味子甲素、五味子乙素峰面積的 RSD 值分別為 0.65%、0.39%。

2.5.6 重現(xiàn)性考察        取生脈散超微粉（批號 ）樣品 6 份，制備供試品溶液，進(jìn)樣分析，計算五味子甲素、五味子乙素質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果五味子甲素、五味子乙素質(zhì)量分?jǐn)?shù)的 RSD 值分別為 0.75%、1.33%。

    2.5.7 穩(wěn)定性試驗 精密吸取生脈散超微粉（批號 ）供試品溶液，分別測定 0、1、2、4、8、 12 h 的峰面積，結(jié)果五味子甲素、五味子乙素峰面積的 RSD 值分別為 1.05%、1.31%，表明供試品溶液在 12 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.8 加樣回收率試驗 分別取生脈散超微粉（批號 ）6 份，每份約 1 g，精密稱定，分別精密加入含五味子甲素 0.312 mg/mL、五味子乙素 0.891 mg/mL 混合對照品溶液各 1 mL，制備供試品溶液，進(jìn)樣分析，計算回收率。結(jié)果五味子甲素、五味子乙素平均回收率分別為 100.3%、99.8%，RSD值分別為 2.0%、1.0%。

2.5.9 樣品測定 精密稱取生脈散細(xì)粉和超微粉樣品各 3 份，制備供試品溶液，分別進(jìn)樣 10 μL，進(jìn)樣分析，計算各成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，見表 1。結(jié)果表明，兩種粉末的含量無明顯差異。

 

2.6 溶出度考察

取生脈散細(xì)粉和超微粉各 4 g，精密稱定，分置于溶出儀中，加 65%乙醇 500 mL 作為溶出介質(zhì)，采用槳狀攪拌器法，恒溫（37±0.5）℃，攪拌轉(zhuǎn)速為 80 r/min，分別于 5、10、15、30、45、60、90、 120、150、180 min 時定位吸取 2 mL，同時將同溫的 65%乙醇 2 mL 補(bǔ)充到溶出儀中。取出液立即過0.45 μm 微孔濾膜，取續(xù)濾液測定五味子甲素、五味子乙素的質(zhì)量濃度，計算各時間點(diǎn)的溶出率，繪制溶出曲線，見圖 5。

結(jié)果表明，生脈散超微粉中五味子甲素在 180 min 溶出量沒有差異，五味子乙素在 180 min 溶出量略高于細(xì)粉；生脈散超微粉中五味子甲素和五味子乙素溶出量達(dá)到總?cè)艹隽康?95%只需 10 min，生脈散細(xì)粉則需要 30 min，溶出速率明顯提高。

3 討論

  采用顯微觀測法對生脈散超微粉碎情況評價，可直觀分析細(xì)胞破壁情況，表明超微粉碎可使生脈散中各種類型細(xì)胞破壁，粒度分布更均勻，有利于質(zhì)量控制。

  生脈散超微粉碎后，對五味子甲素和五味子乙素含量以及溶出率沒有明顯影響，溶出速率有明顯提高。 

  在作溶出度考察時，曾用水作溶出介質(zhì)，但五味子甲素和五味子乙素溶出量很少，考慮到生脈制劑常用一定體積分?jǐn)?shù)的乙醇作溶劑滲濾提取[9]，本實驗采用 65%乙醇作溶劑，溶出率較高。

參考文獻(xiàn)

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[7]   宋 英, 談 靜, 胡 原. 中藥微粉技術(shù)的發(fā)展與展望[J]. 中國中醫(yī)藥信息雜志, 2006, 13(8): 89-91.

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[9] 中國藥典 [S]. 一部. 2010: 653.