通常，溶劑效應(yīng)是由于樣品溶劑強(qiáng)度大于流動(dòng)相強(qiáng)度（比如樣而引起的色譜峰變形現(xiàn)象（如分叉，前沿，脫尾等）。但是，我們會(huì)發(fā)現(xiàn)，有時(shí)我們的樣品溶劑的強(qiáng)度并不大于流動(dòng)相的強(qiáng)度，但由于添加了一些稀釋劑，仍然會(huì)出現(xiàn)峰形變。因此，從廣義上講，“溶劑效應(yīng)”的概念應(yīng)延伸至：樣品中某些組分由于稀釋劑和流動(dòng)相存在差異較大而導(dǎo)致的異常色譜行為。

一、溶劑效應(yīng)的產(chǎn)生過程

階段：樣品剛被注入系統(tǒng)，進(jìn)入色譜柱后，流動(dòng)相氛圍中的目標(biāo)物以正常速度被洗脫。因強(qiáng)溶劑洗脫，移動(dòng)速度快，樣品在空間上開始慢慢分裂。

第二階段：在一定時(shí)間內(nèi)，溶劑氛圍中的目標(biāo)物移動(dòng)始終快一些，前后兩部分距離擴(kuò)大。但移動(dòng)快的目標(biāo)物所處氛圍逐漸被流動(dòng)相稀釋(注：因?yàn)槿軇┖土鲃?dòng)相均不保留)，其移動(dòng)速度會(huì)逐漸降至正常流速。直到前面目標(biāo)物的氛圍被流動(dòng)相替代，前后兩部分的距離穩(wěn)定下來。因而，樣品溶劑與流動(dòng)相洗脫強(qiáng)度差距越大，兩部分目標(biāo)物最終的距離拉的越大。

第三階段：所有目標(biāo)物在色譜柱中正常移動(dòng)，但分裂已不可逆轉(zhuǎn)。

簡單概括，強(qiáng)洗脫溶劑不均衡地參與了目標(biāo)物的洗脫，使色譜峰保留時(shí)間整體提前，而樣品在柱前的不充分?jǐn)U散導(dǎo)致了峰形扭曲。這種影響輕則導(dǎo)致峰展寬，嚴(yán)重時(shí)甚至導(dǎo)致峰裂分，給定性定量帶來災(zāi)難。

二、溶劑效應(yīng)為何會(huì)發(fā)生？

溶劑強(qiáng)度

在反相色譜系統(tǒng)中溶劑強(qiáng)度的順序?yàn)樗ㄗ钊酰技状迹家译妫家掖迹妓臍溥秽急迹级燃淄椋ǎ?。溶解樣品的溶劑?qiáng)度大于該樣品出峰時(shí)流動(dòng)相強(qiáng)度，樣品溶劑可以看成流動(dòng)相的一部分，一部分樣品溶解于溶劑中會(huì)被迅速洗脫出色譜柱，而一部分樣品溶解于流動(dòng)相，被流動(dòng)相洗脫出，這樣會(huì)造成色譜峰的展寬或者分叉。

進(jìn)樣體積

當(dāng)進(jìn)樣體積較小時(shí)，擴(kuò)散至流動(dòng)相中的溶質(zhì)占大多數(shù)，且擴(kuò)散在很短時(shí)間內(nèi)完成，因此峰形與用流動(dòng)相直接溶解樣品無大差異。隨著進(jìn)樣的體積增大，留在溶劑本身里的溶質(zhì)的量逐漸增大，當(dāng)進(jìn)樣體積增大到一定數(shù)量，留在溶劑里的溶質(zhì)的量變得不可忽略，在色譜圖上就表現(xiàn)為色譜峰的分叉、拖尾等。 

溶劑相容性

直接溶解樣品時(shí)，許多小伙伴會(huì)選擇使用氯仿和甲苯等可溶性溶劑，甚至DMSO等“通用溶劑”來溶解樣品。這種進(jìn)樣的結(jié)果是溶劑與流動(dòng)相不相容，溶質(zhì)在流動(dòng)相中難以擴(kuò)散。對(duì)于另一實(shí)例，表面活性劑常加入到參比制劑的溶出曲線中的溶劑中。注入含表面活性劑的溶劑后，含表面活性劑溶劑中溶質(zhì)的分布系數(shù)與流動(dòng)相中的分布系數(shù)有很大差異，會(huì)導(dǎo)致峰形問題，甚至保留時(shí)間漂移。

電離態(tài)

電離態(tài)的差異主要是由溶劑和流動(dòng)相的pH值差異引起的。我們都知道，在反相體系中，由于目標(biāo)化合物的現(xiàn)有狀態(tài)不同，保留行為會(huì)有很大差異，而現(xiàn)有狀態(tài)取決于目標(biāo)化合物在不同pH體系中的電離狀態(tài)。如果樣品在溶劑和流動(dòng)相中的電離狀態(tài)相差很大，并且樣品溶液在接觸流動(dòng)相的過程中沒有時(shí)間緩沖到流動(dòng)相中的電離態(tài)，那就是時(shí)間。如果較長，則很容易顯示保留時(shí)間未對(duì)準(zhǔn)或峰形變形。

（流動(dòng)相為pH 3.0緩沖鹽。綠色譜圖為對(duì)照品，另外三個(gè)譜圖樣品的溶劑從下至上分別為0.1%磷酸、純化水、pH 3.0流動(dòng)相）

三、如何解決溶劑效應(yīng)

改變?nèi)軇?qiáng)度

解決溶劑效應(yīng)最穩(wěn)妥的辦法就是改變樣品溶劑的強(qiáng)度，例如用流動(dòng)相去溶解樣品，梯度洗脫的條件下，可以選擇初始流動(dòng)相作為樣品溶劑；或者選擇與流動(dòng)相洗脫能力接近的溶劑作為樣品溶劑。若流動(dòng)相或流動(dòng)相中的有機(jī)相無法直接溶解樣品，或溶解性較差（常在制備色譜中碰到），則用可以溶解樣品的溶劑將樣品溶解配制成高濃度儲(chǔ)備液，然后再用流動(dòng)相盡可能的去稀釋至所需的濃度大小。

降低進(jìn)樣體積

當(dāng)樣品溶劑洗脫能力大于流動(dòng)相時(shí)，由于樣品溶劑瞬時(shí)流動(dòng)相的作用，容易產(chǎn)生峰形前延。峰形前延的程度與進(jìn)樣量有關(guān)，進(jìn)樣量越大，前延越厲害，溶劑效應(yīng)越明顯。反之進(jìn)樣量越小，溶劑效應(yīng)也越小。因此降低進(jìn)樣體積能有效削弱或消除溶劑效應(yīng)。

柱前管路

對(duì)于梯度洗脫而言，在不影響分離度的情況下，可以改用較粗內(nèi)徑的柱前管路。(注意：若是等度洗脫，此方法會(huì)降低柱效；若是梯度洗脫，基本不影響柱效)。 以上便是本期液相色譜種“溶劑效應(yīng)”的全部內(nèi)容。高效液相色譜進(jìn)樣前，必須選擇一種合適的溶劑體系，若溶劑選擇不當(dāng)會(huì)使得峰形發(fā)生不同程度的異常，進(jìn)而影響分析結(jié)果。

改變電離狀態(tài)

當(dāng)稀釋劑與流動(dòng)相的pH不一致時(shí)，稀釋劑在流經(jīng)色譜柱時(shí)，會(huì)改變周圍環(huán)境的pH，從而可能改變分析物的電離狀態(tài)進(jìn)而影響其保留行為。通常表現(xiàn)為保留時(shí)間的漂移或不穩(wěn)定?？梢酝ㄟ^將樣品溶液的pH調(diào)節(jié)至與流動(dòng)相一致，或增大流動(dòng)相的緩沖能力來改善。

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