熒光顯微鏡用于研究化學(xué)物質(zhì)在細(xì)胞中的吸收、運(yùn)輸、分布和定位。被測物體產(chǎn)生熒光的方式有兩種:自發(fā)熒光。紫外線照射后的直接熒光稱為二次熒光。被觀察物體只有經(jīng)過熒光染料處理和紫外線照射后才能發(fā)出熒光。細(xì)胞中的一些物質(zhì),如葉綠素,在暴露于紫外線后會產(chǎn)生自發(fā)熒光。雖然其他物質(zhì)沒有熒光,但在用熒光染料或熒光抗體染色后,它們可以發(fā)出二次熒光。
熒光顯微鏡采用發(fā)光效率高的點(diǎn)光源,發(fā)射一定波長的光(紫外光365nm或紫藍(lán)光420nm)作為激發(fā)光,激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出各種顏色的熒光,然后通過物鏡和目鏡放大觀察。在這種強(qiáng)對比背景下,即使熒光很弱,也很容易識別,并且具有很高的靈敏度。主要用于研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)、功能和化學(xué)成分。
如何選擇熒光顯微鏡而不被愚弄?
熒光顯微鏡可分為兩種類型:透射顯微鏡和下落顯微鏡。前者是原始的,后者是的。兩種熒光顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)相似,主要區(qū)別在于:透射激發(fā)光通過樣品,整個(gè)樣品產(chǎn)生熒光,然后進(jìn)入物鏡。放大倍數(shù)越高,熒光越弱;入射的激發(fā)光投射到樣品表面,樣品表面產(chǎn)生熒光,然后熒光進(jìn)入物鏡。放大倍數(shù)越高,熒光強(qiáng)度越強(qiáng),適合高功率觀測。
熒光顯微鏡的主要部件包括汞燈光源、激發(fā)濾板、二向色鏡(落下式)、壓濾板、暗場濃縮器(透射式)等。此外,由于汞燈受熱嚴(yán)重,大多數(shù)都配備了吸熱過濾器。一些熒光顯微鏡也有相位差物鏡和環(huán)形光圈,因此可以進(jìn)行相位差觀測。熒光顯微鏡采用倒置框架,以及倒置顯微鏡等。
此外,通過安裝CCD將顯微鏡看到的物理圖像轉(zhuǎn)換為數(shù)字模擬圖像并在計(jì)算機(jī)上成像,可以將上述所有顯微鏡組裝成數(shù)字顯微鏡。因此,我們可以從傳統(tǒng)的普通雙筒望遠(yuǎn)鏡觀察到的顯示器上的再現(xiàn)來研究微場,從而提高工作效率。