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高效液相色譜法檢測(cè)飼料中孔雀石綠的方法

2025年06月15日 09:41:13      來(lái)源：濰坊普分儀器有限公司 >> 進(jìn)入該公司展臺(tái)      閱讀量：7

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高效液相色譜法檢測(cè)飼料中孔雀石綠的方法

孔雀石綠（malachitegreen）又稱為苯胺綠、維多利亞綠或中國(guó)(China)綠，是一種具有金屬光澤的綠色晶體?？兹甘G的化學(xué)官能團(tuán)三苯沼氣(CH4)是一種致癌物資，且其易在魚(yú)體內(nèi)和情況中殘留，存在致突變、致畸和致癌的危險(xiǎn)，故我國(guó)、美國(guó)(United States)、加拿大(Canada)以及歐盟等很多國(guó)度均制止其在經(jīng)濟(jì)魚(yú)類（觀賞魚(yú)除外）和人類食用魚(yú)中應(yīng)用。魚(yú)粉是飼猜中動(dòng)物卵白的重要起源，含有孔雀石綠及其代謝物的魚(yú)粉添加到飼猜中可經(jīng)由進(jìn)程食品鏈要挾到人類健康。

我所現(xiàn)采用NY/T 1756-2009標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)用深圳普分科技有限公司高效液相色譜法（HPLC）對(duì)飼料中孔雀石綠進(jìn)行測(cè)定，本標(biāo)準(zhǔn)適用于配合飼料、濃縮飼料、添加劑預(yù)混合飼料、魚(yú)粉中孔雀石綠和無(wú)色孔雀石綠含量的測(cè)定。液相色譜法孔雀石綠和無(wú)色孔雀石綠的定量限均為 10μg/kg；液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的定量限均為 1.0 μg/kg?，F(xiàn)將該方法簡(jiǎn)要介紹如下：
1.原理 以乙腈-乙酸鈉緩沖溶液提取樣品中的孔雀石綠和無(wú)色孔雀石綠，提取液經(jīng)過(guò)二氯甲烷液液萃取，再經(jīng)固相萃取柱凈化，用接有二氧化鉛柱的氰基柱進(jìn)行高效液相色譜分離，紫外可見(jiàn)光檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。
2. 分析步驟
2.1 提取 稱取飼料樣品約 5g (**到 0.001g) ，置于100ml離心管中，依次加入1.5ml鹽酸羥胺溶液、2ml對(duì)甲苯磺酸溶液、5ml乙酸鈉緩沖溶液和 20 ml乙腈，加入約2g 酸性氧化鋁，振蕩2min，超聲30 min，4 000 r/min 離心5 min。將上清液轉(zhuǎn)移至250 ml分液漏斗中，向離心管中再次加入20 ml乙腈，振搖2 min，4000 r/min 離心5 min，合并上清液至分液漏斗中。
2.2 液液萃取 加入50ml氯化鈉溶液、50ml二氯甲烷，旋搖，靜置分層。用蒸發(fā)瓶收集下層液體后，在分液漏斗再次加入 20ml二氯甲烷，旋搖，靜置分層，收集下層液體于同一蒸發(fā)瓶。將收集液35℃下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(注意：開(kāi)始時(shí)溫度不要直接升35℃，以免爆沸)至近干，加入5 ml，乙腈溶解殘?jiān)?，備用?
2.3 凈化
2.3.1 固相萃取柱的活化 按中性氧化鋁柱在上、PRS 柱在下的順序?qū)芍?lián)，使用前用 5ml乙腈預(yù)洗兩柱。
2.3.2上樣 將2.3.1的樣液緩慢轉(zhuǎn)移到中性氧化鋁柱內(nèi),在抽真空情況下過(guò)柱(保持流速 1 ml／min) 。再用5ml乙腈洗滌蒸發(fā)瓶2次，洗滌液均轉(zhuǎn)移至柱內(nèi)，*后用 5 ml乙腈洗滌小柱。
2.3.3洗脫收集 棄去中性氧化鋁柱，用乙腈-乙酸鈉緩沖溶液2ml、鹽酸羥胺甲醇溶液lml洗脫，收集洗脫液，過(guò)膜(孔徑0.45μm)，上機(jī)測(cè)定。
2.4樣品測(cè)定
2.4.1色譜條件
色譜柱：氰基柱，250 mm ×4.6 mm，柱后氧化鉛柱：35 mm×4.6 mm。 流動(dòng)相：乙腈＋乙酸鈉緩沖溶液＝60＋40 (v＋v) ；
流速：1.0 ml/min 。
柱溫：室溫。
進(jìn)樣量：50 μl。
檢測(cè)波長(zhǎng)：600 nm。
2.4.2定量測(cè)定 按高效液相色譜儀說(shuō)明書(shū)調(diào)整儀器操作參數(shù)。向液相色譜儀中注入孔雀石綠和無(wú)色孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)工作液及試樣溶液，得到色譜峰面積響應(yīng)值，用外標(biāo)法定量。
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