便攜式酶標(biāo)儀應(yīng)用廣泛，酶標(biāo)儀主要功能模塊熒光與化學(xué)發(fā)光模塊可實現(xiàn)對細(xì)胞中鈣離子通道的檢測。
生物膜離子通道是各種無機離子跨膜運動被動運輸?shù)耐?。生物膜上無機離子出入細(xì)胞的方式有被動運輸(順離子濃度)與主動運輸(逆離子濃度)。其中被動運輸?shù)耐繁环Q為離子通道。Ca2+通道廣泛存在于各種生物組織的細(xì)胞膜中。藥物對Ca2+通道的作用可分為：①通道阻斷或抑制劑，可分為苯烷基胺類(如異博定、甲基異博定D600)、苯硫氮?類、雙氫吡啶類等類型。②通道激活劑，一些雙氫吡啶化合物如BayK8644等藥物可活化Ca2+通道。鈣離子通道定義：它是一種跨越細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)，它嚴(yán)格控制著鈣離子進(jìn)入細(xì)胞的過程。由于鈣離子信號與很多重要生理功能相關(guān)，例如心臟收縮、基因轉(zhuǎn)錄等，因此調(diào)節(jié)鈣離子進(jìn)入細(xì)胞的反饋機制就關(guān)重要。
便攜式酶標(biāo)儀用于檢測鈣離子通路主要通過兩種方式：
1，熒光法。化合物與細(xì)胞膜上離子通道結(jié)合后，改變離子通道狀態(tài)，通道打開，鈣離子進(jìn)入細(xì)胞。進(jìn)入細(xì)胞后與細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光指示劑結(jié)合，發(fā)出熒光后酶標(biāo)儀捕獲，熒光強度與進(jìn)入細(xì)胞的鈣離子含量成正比。熒光指示劑多用FLuo3，F(xiàn)luo3-AM是一種可以乙酰甲酯衍生物，可以穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切成FLuo3并滯留在細(xì)胞內(nèi)，鈣離子進(jìn)入細(xì)胞后與之結(jié)合，會發(fā)出較強的熒光。
2，發(fā)光法。水母發(fā)光蛋白復(fù)合物由22kDa的水母蛋白、分子氧和底物腔腸素組成。只有當(dāng)鈣離子該復(fù)合物結(jié)合后，腔腸素才能被氧化生成高能量產(chǎn)物Coelenteramide，同時釋放出CO2和藍(lán)色熒光(——466 nm)。正是此Ca2+依賴性的反應(yīng)過程，使得腔腸素非常適用于監(jiān)測活細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平。與常規(guī)的熒光鈣離子指示劑相比，其主要具有以下幾個優(yōu)點，1)能檢測較大范圍的鈣濃度 – 從0.1 μM >100μM;2)樣品無自體熒光，背景熒光低于使用熒光鈣離子指示劑;雖然信號比使用熒光鈣離子指示劑弱，但是通過成像儀器可以得到更高的信噪比，因此具有更高的靈敏度。3)水母發(fā)光蛋白復(fù)合體能夠穩(wěn)定維持在細(xì)胞內(nèi)，使其能夠進(jìn)行數(shù)小時數(shù)天的鈣離子監(jiān)測。
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