細(xì)胞培養(yǎng)無菌室，是我們培養(yǎng)細(xì)胞和相關(guān)實(shí)驗(yàn)賴以操作的大環(huán)境，保證大環(huán)境的潔凈要求，是防止細(xì)胞污染的有效途徑，細(xì)胞的良好狀態(tài)也會(huì)給我們細(xì)胞相關(guān)實(shí)驗(yàn)提供有力的保證。就一些小細(xì)節(jié)部分與大家分享一下。
1 無菌室應(yīng)設(shè)有無菌操作間和緩沖間；無菌室內(nèi)的地面、墻壁必須平整，不易藏污納垢，便于清洗；無菌室應(yīng)保持清潔，嚴(yán)禁堆放雜物，以防污染。

2 無菌室應(yīng)備有常用消毒劑，方便使用。如三氯異氰尿酸泡騰片（健之素消毒劑）、5％甲酚溶液，70％酒精，0.1％新潔爾滅溶液等。使用健之素消毒劑消毒時(shí)應(yīng)配制成適宜的濃度。

3 無菌物品必須保存在無菌包或滅菌容器內(nèi)，應(yīng)按消毒日期順序放置在固定的柜櫥內(nèi)，并保持清潔干燥，與非滅菌品分開放置，并經(jīng)常檢查無菌包或容器是否過期。無菌包一經(jīng)打開即不能視為無菌，應(yīng)盡早使用。凡已取出的無菌物品雖未使用也不可再放回?zé)o菌容器內(nèi)。

4 操作人員進(jìn)入無菌室應(yīng)先關(guān)掉紫外燈，至少15min后方可入內(nèi)。進(jìn)入無菌室前，先用肥皂或消毒液洗手消毒，在緩沖間更換專用工作服、鞋、帽子、口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭雙手)。

5 做完實(shí)驗(yàn)后清理操作臺(tái)，用消毒劑擦拭臺(tái)面及操作臺(tái)上的物品，為下一次實(shí)驗(yàn)做好準(zhǔn)備。

6 超凈臺(tái)是利用空氣層流裝置排除工作臺(tái)面上部包括微生物在內(nèi)的各種微小塵埃。通過電動(dòng)裝置使空氣通過高效過濾器具后進(jìn)入工作臺(tái)面，使臺(tái)面始終保持在流動(dòng)無菌空氣控制之下。在接近外部的一方有一道高速流動(dòng)的氣簾防止外部帶菌空氣進(jìn)入。必須定期檢查超凈臺(tái)氣簾的可靠性。

7 超凈臺(tái)中試驗(yàn)所用物品和耗材，應(yīng)擺放整齊；除電動(dòng)助吸器、移液槍、真空泵吸頭外，所用物品一律用酒精浸泡過的鑷子夾取，不得用手直接接觸。超凈臺(tái)試驗(yàn)開始前，應(yīng)用70～75%的酒精棉球擦拭臺(tái)面，試驗(yàn)中如有液滴滴在臺(tái)面上，亦應(yīng)立即用酒精棉擦除。操作前雙手用酒精噴灑，試驗(yàn)中雙手離開超凈臺(tái)，再回超凈臺(tái)時(shí)，須再次噴灑酒精。超凈臺(tái)試驗(yàn)中，有試劑或者培養(yǎng)液的瓶子或者培養(yǎng)皿，不宜敞蓋太久，蓋子朝下放置于臺(tái)面。超凈臺(tái)試驗(yàn)中，從外拿入超凈臺(tái)的試劑瓶或者其他物品，應(yīng)用酒精認(rèn)真擦拭其外表面。

8 CO2培養(yǎng)箱要定期檢查、清洗、消毒。清洗時(shí)應(yīng)拆下內(nèi)部組件，清洗，用過氧乙酸擦拭后再用新潔爾滅擦拭，然后用酒精擦拭，安裝好后用紫外照射箱內(nèi)30min。每次操作時(shí)都要將培養(yǎng)箱擦拭；箱內(nèi)培養(yǎng)皿、培養(yǎng)板要合理放置，疊加不要超過三層。

9 嚴(yán)防污染事件發(fā)生。污染細(xì)胞株、污染耗材等應(yīng)通通丟棄；“寧可錯(cuò)殺一千，不可放過一個(gè)”。

10 無菌室應(yīng)每月檢查菌落數(shù)。在超凈工作臺(tái)開啟的狀態(tài)下，取內(nèi)徑90mm的無菌培養(yǎng)皿若干，無菌操作分別注入融化并冷卻至約45℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí)，證明無菌后，取平板3～5個(gè)，分別放置工作位置的左中右等處，開蓋暴露30分鐘后，倒置于30～35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí)，取出檢查。100級(jí)潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得超過1個(gè)菌落，10000級(jí)潔凈室平均不得超過3個(gè)菌落。如超過限度，應(yīng)對無菌室進(jìn)行消毒，直至重復(fù)檢查合乎要求為止。