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蛋白質(zhì)濃度的測定是常見的生物實驗之一。本文介紹的是使用BCA法（二辛可酸法或二喹啉甲酸法）進行蛋白質(zhì)濃度的測定。

一、實驗原理

BCA是一種穩(wěn)定的堿性水溶性復合物。在堿性條件下，蛋白質(zhì)可以將BCA試劑中的二價銅離子Cu²⁺還原成一價銅離子Cu⁺，接著還原出來的Cu⁺與BCA試劑螯合形成紫藍色絡合物，該絡合物在562nm處有強烈的光吸收，且蛋白質(zhì)濃度和其吸光度在一定范圍內(nèi)（如50-2000μg/ml濃度）是具有良好的線性關(guān)系的，因此可以通過制作蛋白質(zhì)濃度與其在562nm處的吸光度的標準曲線，根據(jù)待測蛋白的吸光度對照標準曲線就可計算待測蛋白濃度。

原理圖：

步反應：

第二步反應：

二、實驗步驟

實驗器材：可調(diào)分光光度計、恒溫水浴箱、移液器、移液管、試管若干
實驗試劑
試劑A：含1%BCA二鈉鹽、2%、16%酒石酸鈉、0.4%氫氧化鈉、0.95%,將上述液體混合后調(diào)pH到11.25。
試劑B:：4%硫酸銅溶液。
BCA工作液：將試劑A和試劑B先分別搖晃混勻，然后按照50:1的比例配置BCA工作液，之后再充分混勻并在24小時內(nèi)使用。
蛋白質(zhì)標準液：可選用牛血清白蛋白（BSA）作為標準蛋白。準確稱取150mg牛血清白蛋白,溶于100mL蒸餾水中,即得5mg/mL的蛋白質(zhì)標準液。之后還可以分別吸取不同容量的標準液并與蒸餾水混合稀釋成不同濃度的蛋白質(zhì)標準液。
待測樣品。
實驗操作
選取7支潔凈試管，其中5支標號1-5號管，其他2支分別標簽空白管和待測管。按照下表用移液器準確移取相應的標準蛋白溶液或待測樣品、蒸餾水和BCA工作液于試管中。

注意：稀釋后的標準蛋白溶液或待測樣品與BCA工作液混合比例應為1:20。